LY/T 3107-2019 柳树品种微卫星标记鉴别技术规程 免费下载

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LY/T 3107

内容简介

LY/T 3107-2019 柳树品种微卫星标记鉴别技术规程
1范围
LY/T 3107-2019规定了以柳属(Salix)植物DNA为材料，利用微卫星标记(microsatllite)对国家和省审(认)定的柳树品种进行分子鉴定的规范化操作技术。
LY/T 3107-2019适用于附录A中所列柳树品种的鉴别。
2术语和定义
2.1 微卫星标记microsatellite
微卫星标记，又被称为短串联重复序列(short tandem repeats, STRs)或简单重复序列(simple sequence repeats,简称SSR)，是指基因组中由2~6个核苷酸组成的DNA串联重复序列。
2.2基因型频率genotype frequency
基因型频率指不同基因型在全部个体中所占的比率，全部基因型频率的总和为1或100%。
3操作程序
3.1取样和保存
取柳树幼嫩叶片5片~10片，用干燥硅胶密封保存，用于DNA提取。
3.2 DNA 提取所需试剂
a)1 MTris:称取12.11 g Tris溶解到80 mL超纯水中，调节pH=8.0，定容到100 mL。
b)0.5 M EDTA:称取18.61 gEDTA溶解到80 mL超纯水中，调节pH=8.0，定容到100 mL。
c)5 M氯化钠:称取23.38 g氯化钠溶解到80 mL超纯水中，定容到100 mL。
d)5M醋酸钾:称取25.54g醋酸钾，200mL超纯水溶解后定容到250mL。
e)2%SDS:称取1.0g 十二烷基硫酸钠(SDS), 40 mL超纯水溶解后定容到50 mL。.
f) 10% CTAB:称取10 g CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)溶解到80 mL超纯水中,定容到 100 mL。
g)氯仿异戊醇: 240mL氯仿，10 mL异戊醇混合。
h) 70%乙醇: 70mL乙醇，加入30 mL超纯水。
i)CTAB裂解液: 1 mL1 M Tris(pH=8.0),4 mL 0.5 M EDTA(pH=8.0), 28 mL5M氯化钠, 10 mL 10% . CTAB，5g聚乙烯吡咯烷酮，定容到100 mL。
 

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